高中生物实验知识点总结
一、光学显微镜的结构、呈像原理、放大倍数计算方法
结构：
光学部分：目镜、镜筒、物镜、遮光器（有大小光圈）和反光镜（有平面镜和凹面镜）机械部分：镜座、倾斜关节、镜臂、载物台（上有通光孔、压片夹）、镜头转换器、粗、细准焦螺旋。
注：目镜无旋转螺丝，镜头越长，放大倍数越小；物镜有旋转螺丝，镜头越长，放大倍数越大。
呈像原理：映入眼球内的是倒立放大的虚像。（物镜质量的优劣直接影响成像的清晰程度）放大倍数：目镜和物镜二者放大倍数的乘积）
注：显微镜放大倍数是指直径倍数，即长度和宽度，而不是面积。
二、显微镜的使用：置镜（装镜头）→对光→置片→调焦→观察
1.安放。显微镜放置在桌前略偏左，距桌缘8―10cm处，装好物镜和目镜（目镜5×物镜10×）
2.对光。转动转换器，使低倍镜对准通光孔，选取较大光圈对准通光孔。左眼注视目镜，同时把反光镜转向光源，直至视野光亮均匀适度。调节视野亮度只可用遮光器和反光镜，光线过强，改用较小光圈或用平面反光镜；光线过弱，改用较大光圈或用凹面反光镜。选低倍镜→选较大的光圈→选反光镜（左眼观察）
3.观察。将切片或装片放在载物台上，标本正对通光孔中心。转动粗准焦螺旋（顺时针），俯首侧视镜筒慢慢下降，直到物镜接近切片（约0.5cm），左眼观察目镜，（反时针）旋转粗准焦螺旋，使镜筒慢慢上升，看到物像时轻微来回旋转细准焦，直到物像清晰。（找不到物像时，可重复一次或移动装片使标本移至通光孔中心）。.观察时两眼都要睁开，便于左眼观察，右眼看着画图。侧面观察降镜筒→左眼观察找物像→细准焦螺旋调清晰
4.高倍镜的转换。找到物像后，把要观察的物像移到视野中央，把低倍镜移走，换上高倍镜，只准用细准焦螺旋和反光镜把视野调整清晰，直到物像清楚为止。
顺序：移装片→转动镜头转换器→调反光镜或光圈→调细准焦螺旋
注：换高倍物镜时只能移动转换器，换镜后，只准调节细准焦和反光镜（或光圈）。问1：低倍镜换为高倍镜后，若看不到或看不清原来的像，可能原因？（ABC）
A、物像不在视野中B、焦距不在同一平面C、载玻片放反，盖玻片在下面D、未换目镜问2：放大倍数与视野的关系：
放大倍数越小，视野范围越大，看到的细胞数目越多，视野越亮，工作距离越长；放大倍数越大，视野范围越小，看到的细胞数目越少，视野越暗，工作距离越短。故装片不能反放。
5.装片的制作和移动：制作：滴清水→放材料→盖片
移动：物像在何方，就将载玻片向何处移。（原因：物像移动的方向和实际移动玻片的方向相反）
6.污点判断：1）污点随载玻片的移动而移动，则位于载玻片上；
2）污点不随载玻片移动，换目镜后消失，则位于目镜；换物镜后消失，则位于物镜；
3）污点不随载玻片移动，换镜后也不消失，则位于反光镜上。
7.完毕工作。使用完毕后，取下装片，转动镜头转换器，逆时针旋出物镜，旋进镜头盒；取出目镜，插进镜头盒，盖上。把显微镜放正。
实验一：观察DNA、RNA在细胞中的分布（必修一P26）
一.实验目的：初步掌握观察DNA和RNA在细胞中分布的方法
二.实验原理：
1.甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。
2.盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色休中的DNA和蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。
三.方法步骤：
操作步骤注意问题解释
取口腔上皮细胞制片载玻片要洁净，滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液
用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻刮几下取细胞
将载玻片在酒精灯下烘干防止污迹干扰观察效果
保持细胞原有形态
消毒为防止感染，漱口避免取材失败
固定装片
水解将烘干的载玻片放入质量分数为8%的盐酸溶液中，用300C水浴保温5min改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，促进染色体的DNA与蛋白质分离而被染色冲冼涂片用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10S洗去残留在外的盐酸
染色滴2滴吡罗红甲绿染色剂于载玻片上染色5min
观察先低倍镜观察，选择染色均匀、色泽浅的区域，移至视野中央，调节清晰后才换用高倍物镜观察使观察效果最佳
实验二检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质（必修一P18）
一.实验目的：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质
二.实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。
1.可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu2O沉淀。如：
葡萄糖+Cu(OH)2葡萄糖酸+Cu2O↓（砖红色）+H2O，即Cu(OH)2被还原成Cu2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。
2.脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色）。淀粉遇碘变蓝色。
3.蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。）
三.实验材料
1.做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）
2.做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。
3.做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。
四、实验试剂
斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/mLCuSO4溶液）、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/mLCuSO4溶液）、体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。
五、方法步骤：
（一）可溶性糖的鉴定
操作方法注意问题解释
1.制备组织样液。
（去皮、切块、研磨、过滤）苹果或梨组织液必须临时制备。因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。
2.取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。
3.向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂；
切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu(OH)2在70~900C下分解成黑色CuO和水；
甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无Cu(OH)2生成。
4.试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。
也可用酒精灯对试管直接加热。防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；
缩短实验时间。
（二）脂肪的鉴定
操作方法注意问题解释
花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。干种子要浸泡3~4小时，新花生的浸泡时间可缩短。因为浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，组织较软，切下的薄片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，染色1分钟。染色时间不宜过长。用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。
用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上1~2滴蒸馏水，盖上盖玻片。滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。
低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。装片不宜久放。时间一长，油滴会溶解在乙醇中。
实验一观察DNA和RNA在细胞中的分布
实验原理：DNA绿色，RNA红色
分布：真核生物DNA主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA；RNA主要分布在细胞质中。
实验结果:细胞核呈绿色,细胞质呈红色.
实验二物质鉴定
还原糖+斐林试剂～砖红色沉淀
脂肪+苏丹III～橘黄色
脂肪+苏丹IV～红色
蛋白质+双缩脲试剂～紫色反应
1、还原糖的检测
（1）材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。
（2）试剂：斐林试剂（甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液），现配现用。
（3）步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL（斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入）→水浴加热2min左右→观察颜色变化（白色→浅蓝色→砖红色）★模拟尿糖的检测
1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液
2、检测方法：斐林试剂（水浴加热）或班氏试剂或尿糖试纸
3、结果：（用斐林试剂检测）试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。
4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。
2、脂肪的检测
（1）材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。
（2）步骤：制作切片（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央
↓
染色（滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精）
↓
制作装片（滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片）
↓
镜检鉴定（显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒）
3、蛋白质的检测
（1）试剂：双缩脲试剂（A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液）
（2）步骤：试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL，摇匀→加双缩尿试剂B液4滴，摇匀→观察颜色变化(紫色)
考点提示：
（1）常见还原性糖与非还原性糖有哪些？
葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。
（2)还原性糖植物组织取材条件？
含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。
（3)研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？
加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。
（4）斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？
混合后使用；产生氢氧化铜；氢氧化铜不稳定。
（5)还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为：浅蓝色棕色砖红色
（6）花生种子切片为何要薄？只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。
（7）转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？
切片的厚薄不均匀。
（8）脂肪鉴定中乙醇作用？洗去浮色。
（9）双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？先加A液的目的。怎样通过对比看颜色变化？不能混合；先加A液的目的是使溶液呈碱性；先留出一些大豆组织样液做对比。
实验三观察叶绿体和细胞质流动
1、材料：新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶，口腔上皮细胞临时装片
2、原理：叶绿体在显微镜下观察，绿色,球形或椭球形。
用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色,细胞质接近无色。
知识概要：
取材制片低倍观察高倍观察
考点提示：
（1)为什么可直接取用藓类的小叶，而不能直接取用菠菜叶？
因为藓类的小叶很薄，只有一层细胞组成，而菠菜叶由很多层细胞构成。
（2）取用菠菜叶的下表皮时，为何要稍带些叶肉？
表皮细胞除保卫细胞外，一般不含叶绿体，而叶肉细胞含较多的叶绿体。
（3)怎样加快黑藻细胞质的流动速度？最适温度是多少？
进行光照、提高水温、切伤部分叶片；25℃左右。
（4）对黑藻什么部位的细胞观察，所观察到的细胞质流动的现象最明显？
叶脉附近的细胞。
（5）若视野中某细胞中细胞质的流动方向为顺时针，则在装片中该细胞的细胞质的实际流动方向是怎样的？
仍为顺时针。
（6）是否一般细胞的细胞质不流动，只有黑藻等少数植物的细胞质才流动？
否，活细胞的细胞质都是流动的。
（7）若观察植物根毛细胞细胞质的流动，则对显微镜的视野亮度应如何调节？视野应适当调暗一些，可用反光镜的平面镜来采光或缩小光圈。
（8）在强光照射下，叶绿体的向光面有何变化？叶绿体的受光面积较小有一面面向光源。
实验四观察有丝分裂
1、材料：洋葱根尖（葱，蒜）
2、步骤：（一）洋葱根尖的培养
（二）装片的制作
制作流程：解离→漂洗→
知识点高中
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