酒曲中主要微生物的分离及鉴定

酒曲中主要微生物的分离及鉴定

㈠ 实验目的：本实验对选取的优良酒曲进行微生物的分离和鉴定，把主要的优良功能菌种进行纯种保藏，希望能为酿酒优良菌种的筛选、高效酒曲的生产提供参考。

㈡ 实验材料：1，酒曲微生物来源：经多次酿酒液发酵筛选得的优良民间传统酒曲。

2，主要培养基：牛肉膏-蛋白胨培养基

3，主要试剂：牛肉膏，蛋白胨，75%和95%酒精，10%氯化钠，氢氧化钠-盐酸缓冲液（pH7.0）

4，仪器：培养皿，超净工作台，生化培养箱，普通光学显微镜。

㈢ 实验方法：

1，牛肉膏-蛋白胨培养基的配制

⑴， 配方及配量：牛肉膏0.3克，蛋白胨1克，氯化钠0.5克，琼脂1.5克，水

100ml,pH7.2-7.4。

⑵， 称取药品

⑶， 加热溶解

⑷， 调pH值

⑸， 分装：将配置好的培养基分装在相应的玻璃器皿内待灭 菌。

⑹， 加棉塞

⑺， 包扎：在棉塞外再包上一层牛 皮纸，以防灭菌时冷凝水直接沾湿棉塞及存放

中防止尘埃等污染。

⑻， 灭菌：将待灭菌的培养基放入加压灭菌锅内，于121℃灭菌20min。

⑼， 贮存：经无菌试验，证实培养基已灭菌彻底后，才能收藏于冰箱或清洁的柜

内贮存备用，在存放期间应尽量避免反复移位或晃动等易造成污染的行为。

2，制备无菌生理盐水

称0.85克氯化钠至盛有100ml蒸馏水的三角瓶中，塞上棉塞，塞外包上一层牛皮纸，置加压蒸汽灭菌锅内121℃下灭菌20min即为生理盐水。

3， 酒曲悬液的制备：把所选取的酒曲均匀研成粉末并制成悬液。

⑴， 取6-8支无菌试管，依次编号为10-1,10-2,10-3，…,10-6(或10-8)；再取10套无菌培养皿，依次编号10-4,10-5,10-6（或10-6,10-7,10-8），各稀释浓度做三个重复测定平板，留下一个平板作空白对照。

⑵， 以无菌操作法用 5ml移液管分别精确吸取4.5ml无菌的生理盐水于上述各编号的试管中。

⑶， 每次稀释待测菌的原始样液时，先将其充分摇匀。然后用1ml无菌移液管在原始样液中来回吹吸数次，再精确移取0.5ml菌液至10-1的试管中，然后另取1ml无菌移液管，以同样的方式，先在10-1试管中来回吹吸样品数次，并精确移取0.5ml菌液至10-2的试管中，如此稀释至10-6（或10-8）为止。

4， 酒曲微生物的分离、纯化

分别取上述稀释液0.1ml，采用平板划线分离法接种于牛肉膏-蛋白胨培养基上；每个稀释浓度分别接种9个平板并各取3个平板分别置于18℃、25℃、30℃下培养1-3d，观察。