广东医学２００８年３月第２９卷第３期 ＧｕａｕｇｃＩｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｍａｒ．２００８，Ｖｏ１．２９。Ｎｏ．３ １．２资料收集 收集每位患者肾活检时的收缩压 （ＳＢｒ＇）、舒张压（ＤＢＰ）、血清肌酐（Ｓｃｒ）及２４ ｈ尿蛋白 定量（ＵＰｒｏ）等ｌ｝缶床资料。 １．３胶原纤维染色用Ｍａｓｓｏｎ三色法染色检测肾穿 刺组织标本及正常对照标本中胶原纤维的含量，Ｍａｓ． ｓｏｎ染色中胶原纤维呈蓝色，测定肾间质Ｍａｓｓｏｎ蓝染 区面积与同视野面积的比值。 １．４免疫组化染色采用免疫组化ｓＰ法检测肾穿刺 组织标本及正常对照标本中平滑肌肌动蛋白（Ｏｔ— ＳＭＡ）、波形蛋白（Ｖｉｍｅｎｔｉｎ）和转化生长因子Ｂ（ＴＧＦ— Ｂ）的表达。石蜡切片常规脱蜡至水，鸡蛋清液封闭内 源性生物素，过氧化氢去内源性酶，滴加一抗，分别为 抗Ｏｔ—ＳＭＡ，Ｖｉｍｅｎｔｉｎ及ＴＧＦ—Ｂ单克隆抗体（用ＰＢＳ 代替一抗作阴性对照），４℃孵育过夜，依次滴加生物素 标记二抗、链霉菌抗生物素过氧化物酶，ＤＡＢ显色。所 用试剂均购自福州迈新生物技术有限公司。用北京航 空航天大学Ｍｏｔｉｃ Ｍｅｄ ６．０病理图像分析软件，对每例 标本随机采集５个不含肾小球及动脉的视野（×４００）， 测定肾小管间质Ｏｔ—ＳＭＡ，Ｖｉｍｅｎｔｉｎ及ＴＧＦ—Ｂ免疫组 化染色阳性标记的积分光密度，取平均值。 １．５统计学方法采用ＳＰＳＳ １３．０统计软件，用单因 素方差分析比较各组间差异，相关性用Ｓｐｅａｒｍａｎ等级 相关及直线相关分析。 ２结果 ２．１ 临床指标 不同病理学分级ＩｇＡ肾病患者的血 压、血清肌酐及２４ ｈ尿蛋白定量随着病理分级的增加 逐渐升高，增生硬化组患者的临床指标均显著高于轻 度增生组和局灶增生组（Ｐ＜０．Ｏ１），局灶增生组患者 血压、血清肌酐和２４ ｈ尿蛋白定量均高于轻度增生 组，其中两组问２４ ｈ尿蛋白定量差异有显著性（Ｐ＜ ０．Ｏ１）。见表１。 表１不同病理学分级ＩｇＡ肾病临床指标比较 ｉ±ｓ 组别 倒敷Ｓｌ３１￣（ｍｍ｝ｌｇ） ＯＢＰ（ｍ￣ｇ） Ｓｃｒ（￣／Ｉ，） ＩＪｐｒｏ（￣／２４ ｈ） 轻度增牛缉２７ ｌ１７．８５±１４．８１ ７４．３０±７ ２９ ７０．７０±１３．２１ ０．４９±０．６０ 局灶增生组２８ １２４．８２±１６．７４ ７７ ９３±１０．２８ ９５．２２￣２５．４１ １．７０￣１．６０ 增生硬化组ｌ９ １４１．７４＋３１．６７ ９４．４７±１９．３７ １５０．１１±１０９．８０ ２．８６±１．６５ 与轻度增生组比较Ｐ＜０．Ｏ１；Ａ与局灶增生组比较Ｐ＜０．Ｏ１ ２．２病理指标 ２．２．１ ＴＧＦ—Ｂ，Ｏｔ—ＳＭＡ及Ｖｉｍｅｎｔｉｎ的表达及分布 在正常肾组织中，肾小球及肾间质未见ＴＧＦ—Ｂ表达， 仅少数肾小管上皮细胞呈微弱表达。ＩｇＡ肾病组织 中，肾小管上皮细胞ＴＧＦ—Ｂ表达明显增强（图１）。 Ｏｔ—ＳＭＡ在正常肾组织中仅血管平滑肌细胞表达，ＩｇＡ 肾病组织中肾小管上皮细胞及间质细胞均有Ｏｔ—ＳＭＡ 阳性表达。Ｖｉｍｅｎｔｉｎ在正常肾组织中可见少数间质细 胞阳性，ＩｇＡ肾病组织中间质细胞表达增多，肾小管上 ・４０７・ 皮细胞也出现Ｖｉｍｅｎｔｉｎ表达。不同病理学分级ＩｇＡ肾 病间小管间质ＴＧＦ一１３表达具有显著性差异（Ｐ＜ ０．Ｏ１）。见表２。 圈１ ＩｇＡ肾病组织中ＴＧＦ一１３表达及分布Ｉ×２００） ２．２．２胶原纤维的表达 肾间质胶原纤维Ｍａｓｓｏｎ染 色呈蓝色，随着病变加重，不同病理学分级ＩｇＡ肾病间 胶原纤维的表达逐渐增高，增生硬化组显著高于轻度 增生组和局灶增生组（Ｐ＜０．Ｏ１），局灶增生组显著高 于轻度增生组（Ｐ＜０．Ｏ１）。见表２。 表２不同病理学分级ＩｇＡ肾病小管间质ＴＧＦ～１３， ｑ—ＳＩ￣ＩＡ．Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和ｌ￣ｌａｓｓｏｎ的表达ｘ±５ ★与轻度增生组比较Ｐ＜０．Ｏ１；与局灶增生组比较△Ｐ＜０．０５， △△Ｐ＜０．Ｏ１ ２．３ ＩｇＡ肾病组织中血清肌酐、２４ ｈ尿蛋白定量和 ＴＧＦ—Ｂ，Ｖｉｍｅｎｔｉｎ，Ｏｔ—ＳＭＡ及胶原纤维表达的相关性 ＩｇＡ肾病组织中ＴＧＦ—Ｂ与临床指标血清肌酐、２４ ｈ 尿蛋白定量低度相关（ｒ＜０．４）（Ｐ＜ｏ．０５），Ｖｉｍｅｎｔｉｎ与 Ｏｔ—ＳＭＡ、胶原纤维的表达均呈高度相关（Ｏ．７＜ｒ＜１）（Ｐ ＜０．Ｏ１），Ｏｔ—ＳＭＡ，Ｖｉｍｅｎｔｉｎ及胶原纤维与ｌ｝缶床指标指标 间均呈中度相关（Ｏ．４≤ｒ≤Ｏ．７）（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）。见表３。 表３ ＩｇＡ肾病组织中ＴＧＦ一１３，Ｖｉｍｅｎｔｉｎ，ｄ—ＳＩ￣ＩＡ和胶原纤维 表达的相关性（相关系数ｒ，ｎ：７４） 各项指标两两比较｝Ｐ＜０．０５，★｝Ｐ＜０．０１ ３讨论 ＩｇＡ肾病临床及病理改变多样化，最初认为其预 后良好，但研究发现ＩｇＡ肾病发病１Ｏ一２Ｏ年后大约有 ２０％一４０％的患者进入终末期肾功能衰竭。目前公认 的ＩｇＡ肾病预后不良的临床指标是患者血压、血清肌 维普资讯 http://www.cqvip.com ．４０８． 亡奎垦 ！年３月第２９卷第３期 ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｍａｒ．２００８，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．３ 酐及２４ ｈ尿蛋白定量。ＬＩ等 研究发现，患者血压、 血清肌酐及２４ ｈ尿蛋白定量与组织学分级呈正相关， 与肾脏预后呈负相关。本研究结果显示，不同病理学 分级ＩｇＡ肾病患者的血压、血清肌酐及２４ ｈ尿蛋白定 量随分级增加逐渐升高，增生硬化组患者的各项临床 指标均显著高于轻度增生组和局灶增生组（Ｐ＜ ０．０１），局灶增生组２４ ｈ尿蛋白定量与轻度增生组问 差异有显著性（Ｐ＜０．０１），并且不同病理学分级间表 示纤维化程度的胶原纤维表达也随分级增加逐渐增 高，增生硬化组显著高于轻度增生组和局灶增生组（Ｐ ＜０．０１），局灶增生组显著高于轻度增生组（Ｐ＜ ０．０１），患者血清肌酐、２４ ｈ尿蛋白定量与胶原纤维表 达呈中度相关（Ｐ＜０．０１），证实不同病理学分级ＩｇＡ肾 病随着问质纤维化程度逐渐增高，患者蛋白尿逐渐升 高、肾功能逐渐下降，预后逐渐趋于不良。 肾小管问质纤维化主要病理表现为肾问质ＥＣＭ 聚积、肾小管萎缩、肾间质ＭＦ增多等。肾间质纤维化 的中心环节是成纤维细胞的激活，ＭＦ是成纤维细胞的 激活形式。ＭＦ分泌的胶原量是成纤维细胞的４～５ 倍，加剧了细胞外ＥＣＭ的沉积，更重要的是ＭＦ具有 强大的收缩能力，导致肾脏结构重塑。在病理状态下， 肾小管上皮细胞具有向间充质细胞转化的能力。 ＳＴＲＵＴＺ等 首次报道肾脏纤维化中出现ＥＭＴ的现 象。随后ＯＫＡＤＡ等 及ＦＡＮ等 分别报道在体外实 验中小鼠、大鼠肾小管上皮细胞可转分化为肌成纤维 细胞，ＲＡＳＴＡＬＤＩ等 报道了１３３例不同肾病患者肾活 检结果，他们发现具有ＥＭＴ特性的肾小管上皮细胞数 量与血清肌酐浓度及肾间质损害程度密切相关，这表 明ＥＭＴ参与人肾脏纤维化过程。本研究在肾穿活检 的ＩｇＡ肾病组织中均观察到肾小管上皮细胞表达ｄ— ＳＭＡ和Ｖｉｍｅｎｔｉｎ，且不同病理学分级ＩｇＡ肾病问，随着 病变的发展，轻度增生组、局灶增生组和增生硬化组小 管间质ｄ—ＳＭＡ和Ｖｉｍｅｎｔｉｎ的表达逐渐增高，且差异具 有显著性（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），表明在ＩｇＡ肾病中肾 小管上皮细胞确实发生了表型转化，并且随着ＩｇＡ肾病 的发展，小管上皮细胞转分化逐渐增多。同时，肾小管 间质中ｄ—ＳＭＡ和Ｖｉｍｅｎｔｉｎ表达与胶原纤维表达高度 相关（Ｐ＜０．０１），与患者血清肌酐、２４ ｈ尿蛋白定量中度 相关（Ｐ＜０．０１）。结果提示，转分化的小管上皮细胞参 与了肾间质纤维化病变的进展过程并与患者血清肌酐、 ２４ ｈ尿蛋白定量的改变相关。由此我们推断ＩｇＡ肾病 中肾小管上皮细胞转分化程度与小管间质纤维及肾功 能异常具有相关性，肾小管上皮细胞转分化可能是肾脏 预后不良的关键因素之一，ｄ—ＳＭＡ和Ｖｉｍｅｎｔｉｎ的表达 可能作为评估临床ＩｇＡ肾病预后指标之一。 但是，到目前为止，肾小管上皮细胞转分化的确切 机制尚不清楚。研究发现，有多种因素可促进ＥＭＴ的 发生，其中ＴＧＦ—Ｂ被公认为是最重要的诱导上皮细胞 转分化的细胞因子。ＴＧＦ—Ｂ作为核心因子，启动并调 节ＥＭＴ的全过程 ，其诱导ＥＭＴ的过程也是在病理状 态下导致肾问质纤维化的主要途径 …。本研究显示，在 正常肾组织中，肾小球及肾间质未见ＴＧＦ—Ｂ表达，仅少 数肾小管上皮细胞呈微弱表达。在ＩｇＡ肾病组织中，肾 小管上皮细胞ＴＧＦ—Ｂ表达明显增强，不同病理学分级 ＩｇＡ肾病间ＴＧＦ—Ｂ表达差异有显著性（Ｐ＜０．０１），且 ＴＧＦ—Ｂ表达与ｄ—ＳＭＡ，Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和胶原纤维的表达均 中度相关（Ｐ＜０．０１），与上述报道相符。 综上所述，本研究了发现ＩｇＡ肾病小管上皮细胞 ｄ—ＳＭＡ和Ｖｉｍｅｎｔｉｎ的表达、问质肌成纤维细胞的积 聚、胶原的沉积、小管上皮ＴＧＦ—Ｂ的表达、间质纤维 化、肾功能异常之间有显著相关性。因此认为ＩｇＡ肾 病中肾小管上皮细胞转分化生成肌成纤维细胞，分泌 大量胶原而最终导致纤维化、肾功能衰竭。所以，阻止 肾小管上皮细胞的转分化可能是延缓小管一间质损伤 进展及改善ＩｇＡ肾病预后的主要措施。 参考文献 ［１］ＢＯＧＥＮＳＣＨＵＴＺ Ｏ，ＢＯＨＬＥ Ａ，ＢＡＴＺ Ｃ，ｅｔ ａ１．ＩｇＡ ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ： ｏｎ ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｏｎｇ—ｔｅｒｍ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ２３９ ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｎｅｐｈｒｏｌ，１９９０， １０（２）：１３７—１４７． ［２］ＬＩＵ Ｙ．Ｒｅｎａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ：ｎｅｗ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅｒ— ａｐｅｕｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ，２００６，６９（２）：２１３—２１７． ［３］ＺＥＩＳＢＥＲＧ Ｍ，ＫＡＬＬＵＲＩ Ｒ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｅｐｉｔｈｅｌｉｌａ—ｔｏ—ｍｅｓｅｎ— ｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅｎａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ，２００４，８２（３）： ｌ７５一ｌ８１． ［４］ＬＩ Ｋ Ｔ，ＨＯ Ｋ Ｌ，ＳＺＥＴＯ Ｃ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｏｆＩｇＡ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ—ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ［Ｊ］．Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉｌａ Ｔｒａｎｓｐｌｎａｔ，２００２，１７：６４—６９． ［５］ＳＴＲＵＴＺ Ｆ，ＯＫＡＤＡ Ｈ，ＬＯ Ｃ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒ－ ｃａｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｍａｒｋｅｒ：ＦＳＰ１［Ｊ］．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，１９９５， １３０（２）：３９３—４０５． ［６］ ＯＫＡＤＡ Ｈ，ＤＡＮＯＦＦ Ｔ Ｍ，ＫＡＬＬＵＲＩ Ｒ．ｅｔ ａ１．Ｅａｒｌｙ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｆｓｐｌ ｉｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉｌａ—ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉ— ｏｌ，１９９７，２７３（４ｐｔ２）：５６３—５７４． ［７］ＦＡＮ Ｊ Ｍ，ＮＧ Ｙ Ｙ，ＨＩＬＬ Ｐ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｔｒｎａｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ —－ｂｅｔａ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｕｂｕｌｒａ ｅｐｉｔｈｅｌｉｌａ—－ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｔｒａｎｓｄｉｆｅｒｅｎｔｉａ— ｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｏｒ［Ｊ］．Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ，１９９９，５６（４）：１ ４５５—１ ４６７． ［８］ＲＡＳＴＡＬＤＩ Ｍ Ｐ，ＦＥＲＲＡＲＩＯ Ｆ，ＧＩＡＲＤＩＮＯ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｅｐｉｔｈｅｌｉｌａ —ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒｎａｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｂｕｌａｒ ｅｐｉｔｈｅｌｉｌａ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｒｅｎａｌ ｂｉｏｐｓｉｅｓ【】］．Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ，２００２，６２（１）：１３７—１４６． ［９］ＲＯＢＥＲＴＳ Ａ Ｂ，ＴＩＡＮ Ｆ，ＢＹＦＩＥＬＤ Ｓ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｓｍａｄ３ ｉｓ ｋｅｙ ｔｏ ＴＧＦ—ｂｅｔａ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉｌａ—ｔｏ—ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ．ｆｉ— ｂｒｏｓｉｓ．ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．２００６，１７（１—２）：１９—２７． ［１０］ＲＨＹＵ Ｄ Ｙ，ＹＡＮＧ Ｙ，ＨＡ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ＴＧＦ—－ｂｅｔａｌ—－ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｉｔｏｇｅｎ—－ａｃｔｉｖａｔｄｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｎａｄ ｅｐｉｈｔｅｌｉｌａ—ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅｎａｌ ｔｕｂｕｌａｒ ｅｐｉｈｔｅｌｉｌａ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ，２Ｏ０５，１６（３）：６６７—６７５． （收稿日期：２００７—１０—１６编辑：祝华）
因篇幅问题不能全部显示，请点此查看更多更全内容